液相色譜儀主要有進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。儲(chǔ)液器中的流動(dòng)相被高壓泵打入系統(tǒng),樣品溶液經(jīng)進(jìn)樣器進(jìn)入流動(dòng)相,被流動(dòng)相載入色譜柱(固定相)內(nèi),由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù),在兩相中作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí),經(jīng)過(guò)反復(fù)多次的吸附-解吸的分配過(guò)程,各組分在移動(dòng)速度上產(chǎn)生較大的差別,被分離成單個(gè)組分依次從柱內(nèi)流出,通過(guò)檢測(cè)器時(shí),樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號(hào)傳送到記錄儀,數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來(lái)高效。
液相色譜儀的組成:
1、輸液系統(tǒng)
包括溶劑柜、真空脫氣機(jī)、溶劑混合器、高壓泵等,其中核心部分是泵;泵的作用提供足夠的驅(qū)動(dòng)力使流動(dòng)相通過(guò)填充緊密的色譜柱。
洗脫方式也分為兩種:
?。?)等度洗脫:在同一分析周期內(nèi)流動(dòng)相組成保持恒定,適合于組分?jǐn)?shù)目較少,性質(zhì)差別不大的樣品。
(2)梯度洗脫:采用兩種(或多種)不同極性的溶劑,在分離過(guò)程中按一定程序連續(xù)改變流動(dòng)相的濃度配比和極性的一種洗脫模式。用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品。
2、進(jìn)樣系統(tǒng)
把分析試樣有效地送入色譜柱進(jìn)行分離。一般有自動(dòng)進(jìn)樣器和手動(dòng)進(jìn)樣器,進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的5-10倍(最少3倍)。
3、分離系統(tǒng)
主要是色譜柱,色譜柱是一根裝滿填料的管子。色譜柱的材料有不銹鋼、塑料、玻璃等,其尺寸(內(nèi)徑、長(zhǎng)短)不盡相同;色譜柱填料主要有硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì),填料的粒徑不盡相同。
4、檢測(cè)器
對(duì)檢測(cè)器的要求:靈敏度高、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、死體積小、對(duì)溫度及流量的變化不敏感等。主要有紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、示差檢測(cè)器等。
結(jié)構(gòu)特點(diǎn):
1、液相色譜儀是以液體作為流動(dòng)相的色譜分離方法;
2、流動(dòng)相具有運(yùn)載樣品分子和選擇性分離的雙重作用;
3、適用于高沸點(diǎn)、大分子、強(qiáng)極性和熱穩(wěn)定性差的大分子化合物(常溫進(jìn)樣不破壞藥